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本文标题:"食品微生物的检测-采用不同荧光标记分子"

新闻来源:未知 发布时间:2017-8-13 18:17:36 本站主页地址:http://www.jiance17.com

食品微生物的检测-采用不同荧光标记分子

    分子信标技术(Stratagene, La Jolla, CA)是一种全新的技术
,即将用于食品微生物的检测之中。在这项技术中,所有的反应会
在同一个试管中完成。分子信标是一个特制的发夹形的杂交探针,
它用来与目标PCR产物结合。该探针的一端结合了一个荧光基团,
另一端结合了一个荧光淬灭基团。当不存在目标PC R产物时,分子
信标以发夹形式存在,不会产生荧光信号。当反应生成目标PCR产
物时,分子信标与PCR产物结合从而导致发夹结构伸展。这时淬灭
基团远离荧光基团,荧光信号产生并被检测到。荧光信号的检测是
与PC R反应同步进行的,实现了目标PCR产物的“实时”检测,进
一步可证实样品中目标病原菌的存在。该系统与TaqMan系统具有相
同的效率,不同之处在于分子信标直接检测PCR产物的存在,而Taq
Man系统只能报告链式反应的发生。采用具有不同荧光标记的分子
信标,可在同一个试管中检测不同的PCR产物,因此可以对多种目
标病原菌或分子进行“多重分析”。这是一项崭新的技术,目前尚
未在食品微生物检测领域普及。
    PCR系统的一个主要问题是PCR产物的交叉污染。如果阳性PCR
产物(例如前一次反应得到的沙门菌PCR产物)进人到下次分析的反
应体系中,就会产生假阳性结果。法国巴斯德研究所(Paris, Fran
ce)开发的Probelia系统试图在整个PCR反应过程中采用尿啥吮替代
胸腺啥陡,以消除PCR产物的污染。所以反应管中只有A, U, G, C
四种碱基而没有T。由Probelia系统得到的PC R扩增产物将是AU, G
C配对,而不是常规的AT, GC配对。PCR产物与微孔板中的已知序列
杂交,从而得以识别。杂交结果的检测类似于微孔板中ELISA结果
的检测,也是通过颜色反应显示出来。

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