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本文标题:"提供出更高的光学解析和更佳的观察细胞影像的解析度"

新闻来源:未知 发布时间:2011-11-5 23:17:30 本站主页地址:http://www.jiance17.com

雷射共轭焦显微镜更可根据不同深度的样品,配合镜头和软体可自动调整焦距技术,已可更达到同样的清晰观察效果,使用人员也可任意依照样品的厚度,指定样品的上下点位置,设定每一光学切片的厚度,做连续的光学断层扫描,再藉由雷射激发多重染色的细胞检体,在扫描器及软体支援下,做不同深度与连续性时间之影像扫描分析,能了解细胞三维立体状况及作用时间分布之差异性,并可精确的找出细胞内各项分子物质的传递过程与细胞内微组织的功能。更可在固定样品或活细胞样品上,使用更高解析的多重萤光染剂标定的萤光影像,从不同的取样萤光参数和细胞深度参数,来做静态与动态的观察纪录。最后将所得到多重影像观察资料,从软体支援下将所得影像资料以重组成立体影像,为可呈现出连续式的立体影像放映,达到各种角度的旋转或切面观察,因此,雷射共轭焦显微镜已是近年来研究细胞动力学的一项新利器。

萤光显微镜下所观察的细胞影像或萤光表现,都只有来自聚焦面及非聚焦面的光,只可提供的解析较差的影像品质或呈现萤光影像杂质情况,更无法一层一层的深入样品作观察,为一般萤光显微镜观察的瓶颈。校内研发处已购入雷射共轭焦显微镜 (Confocal Microscope Detection System, Leica TCS SP2),此仪器共具有萤光显微镜目镜: 10X;物镜: 10X、20X、40X (air)、63X (oil) 和 63X (water) 及不同雷射光源: UV Laser (激发波长 351 nm)、Ar Laser (激发波长 488 nm)、He-Ne Laser (激发波长 543 nm) 和 He-Ne Laser (激发波长 633 nm) 的四种波长,置放于立夫教学大楼7F研发处贵重仪器室供校内同仁使用。该系统利用雷射光源可提供单一波长和能量均一性特性,通过光学针孔光圈可蒐集来自样品聚焦面的光所行成影像,将排除非同一聚焦面的光于光学光圈外所形成的共轭焦点影像呈现。同时在雷射光束更具备固定相位特性,使雷射光束聚焦于一小点,做为有效的显微扫描光源,更屏除一般显微镜所造成的影像解析度差 和萤光影像相互干扰问题,透过此种影像技术,提供出更高的光学解析和更佳的观察细胞影像的解析度。


目前,已用萤光标志物分别接枝在正电荷生物高分子(几丁聚醣)和负电荷高分子(肝素),将上述两者带有不同萤光标志物的高分子,利用离子键结反应方式来形成萤光奈米载体,将此萤光奈米载体进行细胞标的,并使用萤光物质 (DAPI) 在进行细胞核染色,藉由校内的雷射共轭焦显微镜和物镜 63X (water) 镜头观察细胞得知,所製备出的萤光奈米载体已可有效进入细胞内,更可被胞饮入细胞核中,此研究结果发表在国际期刊 Biomaterials (2009 年)。进一步,我们为了更加了解当利用奈米载体携带药物后,奈米载体真的可以帮助并提高所需药物进到细胞裡的机会吗? 我们再度利用萤光标志接枝方式,将所使用的药物(抗生素;amoxicillin) 标志上绿色萤光物质,用奈米载体来包覆抗生素的製备技术,形成带有萤光抗生素的奈米载体,进入细胞吞噬实验测试,更使用校内雷射共轭焦显微镜之不同激发波长为: 351 nm (UV Laser)、488 nm (Ar Laser) 和 543 nm (He-Ne Laser) 和结合三维立体重组下,分别观察到奈米载体和药物可同时进入细胞和呈现萤光表现,同时带有萤光的几丁聚醣在不同细胞深度皆有萤光表现,此研究结果发表在国际期刊

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