如何试着去看PBS和DMEM是否污染?

新闻来源:未知 发布时间:2012-4-3 1:07:56 本站主页地址:http://www.jiance17.com

我的问题是最近忽然间发生的...
我养的细胞是乳癌细胞株MCF-7,使用DMEM/F12培养,本身不加抗生素,
然而因为细胞株是Tet-off system,所以有在maintain中加入2μg/ml的Doxycycline(Dox)
在实验起始时以PBS wash 而后分成有Dox与单纯以DMEM/F12无抗生素者培养,诱导目标蛋白表现...
----以上是常态培养情形


问题:
我上次是有发现我实验起始后诱导到一半(全程应6天,但发生在第3天)
细胞会长得很快,而后就死了,DMDM/F12都变成黄色的,但是是澄清的,
细胞在盘底呈现一种白云状(就是形状很像一块一块的白云,但没有飘起来),
如果去移动dish,这时细胞就会飘起来,使medium变成沙沙的,
这时候因为移动dish镜检有晃到,medium就变成混浊的了。
但是有含Dox的那一组则很正常(看起来)
(那时我怀疑是自己一开始种太多,而抗生素会稍微影响细胞生长,诱导需6天,可能因此dish太满)
于是我重新按照一样的方法再作一次,发现一模一样的事又发生了,
心里很毛,所以重新解冻了,

新的细胞我解冻看起来很正常,贴的很好,继代一次之后,

我试着种较少细胞数,但隔天去看却发现细胞不对劲,
我养的8盘DMDM/F12一样都变成黄色的(但是澄清),
细胞在盘底再次呈现一种白云状,
移动dish镜检有晃到,medium就变成混浊的了。
镜检的时候看到的是有点雾雾的,只有少量细胞贴在上面。


请问各位先进,
这是代表什么种类的污染?是浆霉菌吗?
或者有什么简易的方法可确定?
另如何试着去看PBS和DMEM是否污染?


回复:
是水黴,PBS、DMEM、细胞培养箱都得检查清洗
建议你不要去试了 可能有问题的通通扔掉
直接重配medium 重新解冻细胞吧!  

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