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本文标题："仙人掌杆菌实验使用药品样品与培养基"
新闻来源：未知 发布时间：2012-4-12 16:55:28 本站主页地址：http://www.jiance17.com
仙人掌杆菌实验使用药品样品与培养基
(一)培养基
1.甘露糖醇-蛋黄-多黏杆菌素(洋菜)培养基(Mannitol-Egg yolk-Polymyxin agar，简称MYP agar)
牛肉抽出物(Beef extract) 1g 蛋白冻(Peptone) 10g
D-甘露糖醇(D-Mannitol) 10g 氯化钠(NaCl) 10g
酚红(Phenol red) 0.025g 洋菜(Agar) 15g
蒸馏水(Distilled water) 900m l
加热溶解后，以121℃灭菌15分钟，最后pH值为6.8±0.2，冷却至50℃ ，加入50m l无菌之蛋黄液(a)及每ml含1万单位的多黏杆菌素B硫酸盐( Polymyxin B sulfate)溶液10m l(b)。 培养基注入培养皿前，应摇动溷合，使絮状沉淀物分散均匀，摇动时应避免产生气泡。
(a)蛋黄液之配制:鸡蛋洗净，浸入0.1%氯化汞溶液1小时，再浸入70%乙醇溶液中30分钟，取出蛋黄加入等量
之无菌生理食盐水。
(b)每ml含1万单位多黏杆菌素B硫酸盐溶液之配制:取50万单位多黏杆菌素B硫酸盐，溶于33.3m l蒸馏水后，
再以具有0.45um孔径滤膜做无菌过滤。
2.胰化酪蛋白-大豆-多黏杆菌素培养液(Trypticase-Soy-Polymyxin Broth，简称TSB):同葡萄状球菌实验
3.营养洋菜培养基(Nutrient agar):同E.coli实验
4.营养培养基(Nutrient broth):同E.coli实验
5.酚红葡萄糖培养液(Phenol red glucose broth):同金黄色葡萄状球菌实验
6.硝酸盐培养基(Nitrate broth)
(二)药品:
1.亚硝酸盐试验:A solution: 1g对-胺基苯璜酸(Sulfonilic acid)溶于125m l之5N醋酸(acetic acid)中。
B solution: 1g α - 柰酚( α -naphthol) 溶于200m l之5N醋酸(acetic acid)中。
2.碘试剂: 1g KI溶于5ml蒸馏水;加0.5gI2完全溶解后再加蒸馏水成100ml。
样品及培养基 接种日期 备注
1.样品+ 225m l稀释液 第一天( / ) 225m l装入刀口瓶
2.9m l稀释液， 1m l定量吸管，L型玻棒 " 每组四个试管
3.TSB平板(注1) 每组两个平板
4.MYP平板(注2)
5.NA斜面培养基 第二天( / ) 每组两个试管
6革兰氏染色与镜检 第三天( / )
7. H2O2(3%)
8.Phenol red glucose broth+石蜡每组两个试管
9.硝酸盐Borth(Nitrate broth)
10.石蕊牛乳(Litmus milk)
11.营养明胶(Nutri ent gelatin)
12.淀粉培养基(Starch agar)
13.MR-VP培养基
14.血液培养基(Blood agar)
15.酚红糖类培养基
Phenol red mannitol broth
Phenol red sucrose broth
Phenol red salicin broth
Phenol red glycerol broth 每种两个试管
16.亚硝酸盐试验 第四天( / ) A﹑B试剂各加0.5m l
17.碘试剂 第五天( / ) 加入Starch agar
18.VP试剂 第五天( / ) 加入VP medium
19.溶菌素耐性试验 第五天( / )
注1与注2:培养基杀菌后，冷却到50℃后，每0.9L加入100m l无菌蛋黄液及1m l含10万单位的多黏菌数硫酸盐(polymyxin B sulfate)，培养基倒平板前需摇动溷合均匀，但摇动时不可产生气泡。
注3:亚硝酸盐试验:A solution: 1g对-胺基苯璜酸(Sulfonilic acid)溶于125m l之5N醋酸(acetic acid)中。 B.solution: 1g α- 柰酚( α-naphthol) 溶于200m l之5N醋酸(acetic acid)中。
注4:碘试剂: 1g KI溶于5m l蒸馏水;加0.5g I2完全溶解后再加蒸馏水成100m l。
四﹑仙人掌杆菌在各培养基上之典型菌落与反应
样品及培养基 培养基之作用 典型菌落与反应
1.样品+ 225m l稀释液
2.9m l稀释液， 1m l定量吸管等
3.TSB平板 分离﹑筛选及计数圆形﹑扁平﹑干燥﹑呈毛玻璃状﹑半透明到乳白
4.MYP平板
5.NA斜面培养基 培养菌种供做生化试验
6.格兰氏染色与镜检 G(+)﹑杆菌﹑两端方形(长或短链状)﹑孢子椭圆
7.H2O2(3%) Catalase test 产生气泡(+)
8.Phenol red glucose broth 嫌气发酵glucose 黄色(+)
9.硝酸盐Borth(Nitrate broth) 代谢Nitrate 红色(+)
10.石蕊牛乳(Litmus milk) 分解蛋白质 澄清(+)
11.营养明胶(Nutrient gelatin) 分解明胶 不凝固(+)
12.淀粉培养基(Starch agar) 明胶淀粉 透明圈(+)
13.MR-VP培养基 VP反应 VP反应无颜色反应(-)
14.血液培养基(Blood agar) 血反应 透明环(+)
15.酚红糖类培养基 糖利用试验
Phenol red mannitol broth mannitol 红色(-)
Phenol red sucrose broth sucrose 黄色(+)
Phenol red salicin broth salicin salicin黄色(+)
Phenol red glycerol broth glycerol 黄色(+)
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