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本文标题："细胞学-桑椹胚及囊胚细菌培养实验观察用显微镜"
新闻来源：未知 发布时间：2013-10-28 14:40:30 本站主页地址：http://www.jiance17.com
桑椹胚及囊胚细菌培养实验观察用显微镜
桑椹胚(Morula)与干细胞的聚合实验
仪器
1. 解剖显微镜
2. 37℃，5% CO2 培养箱
材料
1. 授精 2.5 天之母鼠
2. 解剖用具
3. 细菌培养皿
4. M2 及 M16 培养液
5. Acid Tyrode's Solution (Sigma T-1788)
6. 矿物油 (Sigma M8410)
7. ES cells
8. Aggregation needle (DN-09, BLS, Hungary)
实验步骤
1. 以 aggregation needle 在细菌培养皿上，钻出适当大小的洞；于洞上滴上 M16培养液滴，
并以矿物油覆盖。
2. 将培养皿放入 37℃, 5% CO2 培养箱备用。
3. 另取一 35mm 培养皿，制备 M16 培养液滴，并以矿物油覆盖。
4. 取授精 2.5 天之母鼠，剪取输卵管与相连之部分子宫，于 M2 液滴中清洗；
于解剖显微镜下，用 M2 培养液，于输卵管开口，以 30 号针头冲出 morulae。
5. 以口吹式毛细管收集 morulae，于 M2 液滴中清洗，置于含 M16 之 35mm 培养皿中培养备用。
6. 取出 ES cells 培养皿，PBS 清洗三次，以 0.05% trypsin 37℃ 作用 30 秒，以培养液中和trypsin 并打下
细胞，800rpm 离心 5 分钟，吸除上清液后以培养液打散细胞。
7. 于显微镜下以毛细管挑取适当的细胞团 （约 8~10 颗一团），于 M16 液滴清洗后置入先前制备之
培养皿洞中（每洞一团细胞）。
8. 于另一培养皿中点上 M2 及 acid tyrode's solution 数滴。
9. 取出 morulae 置于 acid tyrode's solution 中作用数秒，待透明膜溶解后，立即取出置于 M2液滴中清洗。
10. 将去膜之 morulae 置于含 ES cells 细胞团之洞中（每洞两颗），成三明治堆叠状
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