免疫电子显微镜( I S E M ) 等技术被广泛应用于植物病毒诊断

新闻来源:未知 发布时间:2011-11-9 11:04:04
本试验利用橙绿蛋白质染剂染色法 (光学显微镜观察)、阴染及超薄切片法 (电子显微镜观察) 及血清学方法
(酵素联结免疫分析法、组织转渍法及西方转渍法) 均能侦测到罹病组织内之 L N V,且反应明确。就实际应用而
言,使用酵素联结免疫分析法 ( E L I S A ) 较为迅速又可同时侦测较多之样本,但为保证鑑定之品质,经 E L I S A 初步
诊断之结果必要时得再藉由电子显微镜直接观察罹病组织或其他的侦测方法加予佐证,其结果可信度会更高。血清学方法如 E L I S A、dot-blot immunoassy 及免疫电子显微镜( I S E M ) 等技术被广泛应用于植物病毒诊断 ( 9 , 1 0 , 1 7 , 1 9 , 2 0 , 2 1 ),
其中 E L I S A 几乎可侦测每一种植物病毒 ( 9 )。本试验纯化L N V 鞘蛋白 (38 kDa) 做为抗原製备兔子抗血清或以 L N V
老鼠单元抗体应用于 ELISA, Western blot, direct tissue blot
( D T B ) 及 I S E M (5) 均能有效侦测到罹病组织内之 L N V 抗原,但由于老鼠单元抗体可以不断地培养供应,在实际应
用上更计具有价值。
L N V 机械接种于洋桔梗后,以 D T B 侦测结果显示在高温 ( 2 6℃) 情况下接种比低温 ( 2 1℃) 病斑多且病斑较大
(图五),此可能说明在高温时,病毒複製较快且複製之量
较多。在 2 6℃,机械接种 L N V 于洋桔梗,以 i n d i r e c t
E L I S A 及 D T B 比较其侦测 L N V 之效率,结果 D T B 于接种
后 1 2 小时即能侦测到新複製之病毒,而 indirect ELISA 则
于接种后 4 8 小时始能明确侦测到病毒 (表一),显然 D T B
能较早侦测到病毒。E L I S A 虽具有前述之优点,但它仍受
限于实验室进行,而 D T B 则不受此项限制,它可于田间
或苗圃立即取样并进行检测,由于其能较早期侦测到病毒
且操作简便,对于抗病毒育种选拔、大量健康种苗生产之
早期发现病毒,在种苗管理上确具有发展之潜力及实用之
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